Recombinant Trypsin

重组胰蛋白酶(液体)—药典级 Cat.No.：RPT0204 CAS：9002-07-7 EC：3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，与猪yixian来源的胰蛋白酶氨基酸序列一致。   1.产品简介 胰蛋白酶可特异切割赖氨酸及精氨酸C末端肽键，可降解细胞间结合蛋白。雅心生物生产的重组猪胰蛋白酶的氨基酸序列与猪yixian来源的胰蛋白酶一致，由重组大肠杆菌表达生产。可替代传统提取胰酶用于**、干细胞、免疫细胞**、药物筛选、抗体等领域细胞消化过程。抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂等可抑制酶活。   2.产品优势 符合药典标准 符合药典中重组胰蛋白酶的相关标准。 无动物源性 重组生产，生产过程不使用任何动物源原料。无外源性的病毒污染，使用安全。 高纯度 重组生产，不含杂酶，宿主蛋白和DNA残留量符合药典标准。 细胞消化能力强 高纯度，避免了杂质对细胞生长的影响。比活性高，胰蛋白酶添加量低即可达到所需要的消化效果。 质量稳定 稳定连续的批次供应，批间差异小，质量稳定。生产过程遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则，可提供相关法规支持文件。   3.产品特性 检测项目（Items） 标准(Specification) 1.外观Appearance 为无色至淡黄色，澄清液体 Clear, colorless or shallow yellow liquid 2.鉴别 Identification 显紫色 Positive 3.蛋白浓度 Protein Concentration 70±10 mg/ml。 4.纯度（RP-HPLC） β-trypsin≥70%，α-trypsin ≤20% 5.比活 （Specific Activity） ≥3800 (U/mg protein) 6.大肠杆菌菌体蛋白质残留量 E. Coli host Cell protein residue ≤0.01% 7.外源性DNA残留量 Host Cell DNA residues ≤ 10 ng/mg 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个胰蛋白酶单位（USP）。   4.使用说明 1. 溶液配制：重组胰蛋白酶室温下融化，根据COA中的蛋白含量，取适量胰蛋白酶，加入HBSS平衡液（或其他适宜细胞消化的缓冲液，如需要加入EDTA其终浓度推荐0-1mM，**好不超过2mM），推荐一般使用的胰蛋白酶浓度约为0.1-0.3mg/ml（浓度根据不同细胞进行调整），轻柔混匀；该步骤可在室温环境操作； 2. 使用0.22μm滤膜对上述胰蛋白酶溶液过滤并转移至无菌容器中；该步骤可在室温环境操作； 3. 过滤后的胰蛋白酶溶液应在当天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化细胞），该液体可在2-8℃条件下保存1-2周。 4. 长期保存:配好的重组胰蛋白酶细胞消化液，若需长期保存，-20℃保存，可稳定保存12个月；     5.稳定性 储存稳定性：重组胰蛋白酶溶液保存在-20℃以下，12个月稳定； 运输稳定性：干冰保温运输，运输过程不融化，活性稳定。   6.产品用途 细胞培养方面： 1. 组织块消化，原代细胞获取； 2. 贴壁细胞的传代消化； 3. 微载体方法培养的细胞消化； 4. 干细胞温和消化； 5. 免疫细胞**等。 重组蛋白方面： 1. 重组胰岛素生产； 2. 蛋白测序、肽谱图； 3. 蛋白组学研究等特异性蛋白酶解过程。

重组胰蛋白酶冻干粉 无动物源性，无病毒污染 Cat.No.：RPT0203 CAS：9002-07-7 EC：3.4.21.4 储存温度：2-8℃ 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达。 蛋白序列：氨基酸序列与猪yixian来源的胰蛋白酶完全一致。 1.产品简介 胰蛋白酶可特异切割赖氨酸及精氨酸 C 末端肽键，可降解细胞间结合蛋白。雅心生物 生产的重组猪胰蛋白酶的氨基酸序列与猪yixian来源的胰蛋白酶一致，由重组大肠杆菌表 达生产。可替代传统提取胰酶用于**、干细胞、免疫细胞**、药物筛选、抗体等领 域细胞消化过程。抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂等可抑制酶活。 2.产品特性 检测项目标准 外观白色、类白色、类黄色粉末 鉴别显紫色 纯度（RP-HPLC）β-trypsin≥70%，α-trypsin ≤20% 比活≥3800 (U/mg protein) 大肠杆菌菌体蛋白质残留量≤0.01% 外源性DNA残留量≤ 10 ng/mg 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的 吸收值增加0.003定义为一个活力单位。 3.使用方法 1mMHCl溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1： 1000，**适pH为7.0-11.0。 4.储存和运输稳定性 储存稳定性：重组胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；1mM盐酸或50mM醋酸溶 解后储存于-20℃，反复冻融10次，无活性损失。 运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。 5. 产品优势 符合药典标准：符合药典中重组胰蛋白酶的相关标准。 无动物源性：重组生产，生产过程不使用任何动物源原料。无外源性的病毒污染，使用 安全。 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 纯度高：重组生产，不含杂酶，宿主蛋白和DNA残留量符合药典标准。 冻干粉：易于储存和运输。 符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。 质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD，**适pH为7.0- 9.0。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 通常所用的胰蛋白酶为从猪yixian提取纯化得到。在生物制药过程中，为了确保生物制品的用药安全，动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定，比如在胰岛素和**的生产中。雅心生物生产的重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2008的规定，按照GMP操作规范生产，确保了产品质量和批次稳定性。 2.产品优势 无动物源性：重组生产，生产过程不使用任何动物源性的原料。 纯度高：生产过程采用自激活方法，无其它任何杂酶污染。 稳定：冻干粉，易于储存和运输；批量生产，产品质量稳定。 3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪yixian来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl或50mM HAc溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，**适PH为7.0-9.0. 6.相关产品： 重组人胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液；序列分析纯重组胰蛋白酶；序列分析纯重组胰蛋白酶；重组羧肽酶B；

重组抑肽酶 Cat.No.：RTI16-S CAS：9087-70-1 别名：重组胰蛋白酶抑制剂；抑肽酶(牛肺)；抗蛋白酶肽(牛肺)；蛋白酶抑制剂 来源：重组牛抑肽酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 储存温度：液体，-20℃及以下储存。 蛋白序列：氨基酸序列与来源于牛肺的抑肽酶完全一致。   1.产品简介 抑肽酶是丝氨酸蛋白酶的竞争性抑制剂，可抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽原酶等的活性。抑肽酶可与蛋白酶形成稳定的复合物从而封闭酶的活性位点。大多数的抑肽酶-蛋白酶复合物在pH <3的条件下解除结合。抑肽酶与蛋白酶是等摩尔有效结合。重组抑肽酶利用重组大肠杆菌表达，多次柱纯化所得，氨基酸序列与来源于牛肺的抑肽酶完全一致，重组抑肽酶具有与动物源性抑肽酶相同的酶学性质，可替代动物源性抑肽酶用于各种生物技术过程中。   2.产品特性 来源 重组大肠杆菌 外观 液体，澄清，无色至淡黄色 比活 ≥ 3.0 EPU/mg pro. 吸光度（277nm） ≤ 0.8 (3EPU/ml水溶液) 纯度 (HPLC) ≥ 95% 酶活单位：能抑制一个胰蛋白酶单位的活力称为一个抑肽酶活力单位（EPU）。 胰蛋白酶单位：每秒钟能水解1μmol的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）为一个胰蛋白酶单位（microkatal）   3.使用方法 抑肽酶与蛋白酶是等摩尔有效结合，推荐的结合pH >6.0，在pH <3的条件下不结合。   4.储存和稳定性 酶液储存稳定性：重组抑肽酶液体储存于-20℃，24个月稳定。 在2-8℃保存，半年内稳定。反复冻融6次，无活性损失。 运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。   5.产品优势 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 纯度高：宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。 质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。   6.产品用途 抑肽酶是丝氨酸蛋白酶的竞争性抑制剂，可抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽原酶等的活性。 抑肽酶可与蛋白酶形成稳定的复合物从而封闭酶的活性位点。 重组抑肽酶酶具有与动物源性抑肽酶相同的酶学性质，可替代动物来源的抑肽酶应用于各种生物技术过程中，如：重组蛋白生产中抑制丝氨酸蛋白酶的活性；细胞培养等。   7.相关产品 重组（猪/人）胰蛋白酶； 重组糜蛋白酶； 重组肠激酶； 重组羧肽酶B。

重组人胰蛋白酶 Cat.No.: RHT03 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 储存温度：2-8℃ 来源：重组人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达。 蛋白序列：氨基酸序列与人胰蛋白酶完全一致。   1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可切割赖氨酸及精氨酸C末端形成的肽键。雅心重组人胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与人胰蛋白酶完全一致。重组人胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪yixian来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF，抑肽酶等抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。   2.产品特性 来源 重组大肠杆菌 外观 白色、类白色粉末 活性 ≥2500 USP units/mg pro. 冻干粉中的蛋白含量 ≥ 90% 纯度（HPLC） ≥ 95% 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。   3.推荐使用方法 使用1mMHCl溶解，重组人胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，**适pH为7.0-11.0。   4.储存和运输稳定性 储存稳定性：重组人胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；使用1mMHCl溶解后储存于 -20℃，反复冻融10次，无活性损失。 运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。   5.产品优势 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 冻干粉：易于储存和运输。 符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。 质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。   6.产品用途 胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞**；肿瘤的细胞**等。   7.相关产品： 重组羧肽酶B； 重组抑肽酶； 重组肠激酶； 测序级重组胰蛋白酶。

重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD，**适pH为7.0- 9.0。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 通常所用的胰蛋白酶为从猪yixian提取纯化得到。在生物制药过程中，为了确保生物制品的用药安全，动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定，比如在胰岛素和**的生产中。雅心生物生产的重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2015的规定，按照GMP操作规范生产，确保了产品质量和批次稳定性。 2.产品优势 无动物源性：重组生产，生产过程不使用任何动物源性的原料。 纯度高：生产过程采用自激活方法，无其它任何杂酶污染。 稳定：冻干粉，易于储存和运输；批量生产，产品质量稳定。 3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪yixian来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl或50mM HAc溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，**适PH为7.0-9.0. 6.相关产品： 重组人胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液；序列分析纯重组胰蛋白酶；序列分析纯重组胰蛋白酶；重组羧肽酶B；  

重组胰蛋白酶细胞消化液 1.组成： 重组胰蛋白酶冻干粉，无Ca2+ ，Mg2+ ，无EDTA的平衡液，pH7.2～7.4，无菌过滤。   2.产品优势： 无动物源性：重组生产，保证了无动物源性病毒污染。使用安全。 即配即用：冻干剂型，即配即用，固体包装，降低了污染风险。 高纯度：基因工程重组生产，HPLC纯化，不含杂酶、杂蛋白及脂类、DNA等。 细胞消化能力强：室温消化，高纯度，避免了杂质对细胞生长的影响。 无EDTA：在缓冲液中不含有EDTA,但是保持高的细胞消化能力，排除了细胞流式实验中EDTA的影响。   3.使用说明： 配制方法 1. 取1ml冷的平衡液加到含有胰蛋白酶冻干粉的EP管中； 2. 胰蛋白酶充分溶解； 3. 全部移入装有平衡液的瓶中，4h内使用；   注意事项 1. 如一次使用不完，配制后按照每次使用量 立即分装，-20℃保存； 2. 使用时，-20℃取出，室温溶解后使用，不需要37℃预热。 3. 按照以上方法的配置后，.酶的浓度为2000BAEE/ml，如必要，可根据消化效果进行稀释。   4.产品信息： 产品名称 产品编号 活性 包装 产地 重组胰蛋白酶 细胞消化液 RTS04 2000 BAEE u/ml 100ml,500ml  上海雅心 酶活单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.001定义为一个BAEE单位。 酶活单位换算：BAEE unit, USP unit活性单位之间的活性换算：              1USP unit =3 BAEE Unit   5.相关产品： 重组人源胰蛋白酶冻干粉(≥2500 USP U/mg pro)； 重组猪源胰蛋白酶冻干粉(≥3800 USP U/mg pro）    

重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 （96T） 使用前请仔细阅读说明书。若有任何问题，请联系我们。              试剂盒用途 本试剂盒用于体外定量检测大肠菌液体中重组胰蛋白酶含量。本试剂盒仅供研究和工业生产使用。   试剂盒基本参数 灵敏度 < 1 ng/ml 检测范围：0.078 - 40 ng/ml 特异性：可检测重组胰蛋白酶，与其它重组大肠菌表达系统相关蛋白无明显交叉反应。 重复性：板内，板间变异系数均 < 10%。 工作时间：熟练实验人员可在2.5小时内完成一次测定。 有效期：6个月   试剂盒组成及保存 未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周。如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。 中文名称 规格 保存条件 抗体包被的ELISA酶标板（96孔可拆卸) （MicroELISA Plate(Dismountable) 8孔×12条 -20℃ 冻干标准品（40ng/支）(A1) （Reference Standard） 4支 2-8℃ 浓缩辣根过氧化物酶化抗体 (A2)（Concentrated HRP-Detection Ab） 1支×0.05mL -20℃ 标准品 & 样品稀释液 (P1) （Reference Standard & Sample Diluent） 1瓶×20 mL 2-8℃ HRP-抗体稀释液 (P2) （HRP- Ab Diluent） 1瓶×15 mL 2-8℃ 浓缩洗涤液-1（25 X）(P3) （Concentrated Wash Buffer (25x)） 2瓶×20 mL 2-8℃ 浓缩洗涤液-2（25 X）(P4) （Concentrated Wash Buffer (25x) 2瓶×10 mL 2-8℃ 显色底物（TMB）(A3) （Substrate Reagent） 5支×0.125 mL -20℃ 避光 底物稀释液（TMB）(P5) （Substrate Reagent） 1瓶×15 mL 2-8℃ 避光 反应终止液 (P6) （Stop Solution） 1瓶×10 mL 2-8℃ 封板覆膜（可重复使用） （Plate Sealer） 5张   产品说明书 （User Manual） 1份   质检报告 （Certificate of Analysis） 1份     说明: 1、所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。 2、酶标板-20℃可存放6个月，2-8℃存放勿超过一周。   试验所需自备物品 1.酶标仪（滤光片波长450 nm和650nm） 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4.洁净吸水纸   待测样品注意事项 1.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或 -80℃（3个月内检测），避免反复冻融。 2.试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果样品中检测物浓度高于标准品值，请根据实际情况，做适当倍数稀释后再测。 3.若使用化学裂解液制备的样本或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。   检测前准备工作 1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。提前15分钟打开酶标仪预热。 2.洗涤液配制 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1：25）。  提示：从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液温度应为室温）。请当日使用。 3.标准品配制 将标准品于1000转/分离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0 mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10 ng/mL）, 然后进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度:  10、 5、 2.5、 1.25、 0.63、0.312、0.156、0 ng/mL。样品稀释液直接作为空白孔0 ng/mL。   倍比稀释方法 取7只EP管，每管中加入500 μL标准品&样品稀释液，从10 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL加入含有500 μL样品稀释液的EP管中混匀配成5 ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。   标准品稀释图例（以500 μL为例）   提示：一管直接作为空白孔。   4.HRP标记抗体工作液配制 实验前请先将抗体管低速离心，以避免管壁及管盖上残留抗体。计算实验所需用量（以100 μL /孔计算），实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，用抗体稀释液将HRP-标记抗体稀释为工作浓度（抗体：稀释液 = 1：250），当日使用。   5.TMB显色工作液配制 实验前计算实验所需用量（以100 μL /孔计算），实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，用底物稀释液将TMB显色底物稀释为工作浓度（底物：稀释液 =1：20），当日使用。   洗涤方法 自动洗板机：每孔加入洗涤液350 μL， 注入和吸出间隔60秒。 手工洗板： 甩尽孔内液体，在洁净厚吸水纸上拍干，每孔加入洗涤液350 μL，浸泡2-3分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉板内液体，在洁净厚吸水纸上拍干。   操作步骤 1.将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100 μL。待测样加入到其他孔，每孔100 μL，若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后加样。将酶标板覆膜并置于37℃孵育60分钟。 提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间控制在10分钟内。 2.洗涤：弃去液体，甩干，在洁净厚吸水纸上拍干。每孔加入 洗涤液-1 350 μL，浸泡2-3分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉板内液体，在洁净的厚吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。 3.每孔中加入HRP-抗体工作液100 μL，混匀，酶标板覆膜并置于37℃孵育30分钟。     4.洗涤：用 洗涤液1 洗板3次，方法步骤同2。 5.洗涤：用 洗涤液2 洗板2次，方法步骤同2。， 6.每孔加底物显色工作液（TMB）100 μL，酶标板覆膜并置于37℃ 孵育10分钟。 提示: 根据实际显色情况酌情缩短或延长，显色时间在5-30分钟范围内。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。 7.每孔加终止液50 μL，终止反应，室温放置1分钟。 提示: 终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。加液时移液枪枪头切不要接触孔内溶液以避免污染，影响实验结果。 8.用酶标仪在450 nm波长（参考波长650nm）测量各孔的光密度（OD450/650 nm值）。  提示: 请提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置检测程序。   结果判断 1.计算每组复孔的平均OD值。每个标准品的平均OD值减去空白孔的OD值作为矫正值。以标准品的浓度为横坐标（X），OD值为纵坐标（Y），绘出标准曲线（作图时亦可去掉空白组的值）。 2.推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或ELISA Calc（请使用Logistic五参数拟合曲线计算方法绘制标准曲线）等。 3.若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测。 4.典型数据 由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。    X-浓度（ng/mL） 10 5 2.5 1.25 0.625 0.312 0.156 0 Y-OD450/650 nm 1.601 1.454 1.231 0.872 0.624 0.382 0.244 0.057 Y-OD450/650 nm（去本底） 1.574 1.397 1.174 0.815 0.567 0.325 0.187 0 回收量（ng/mL） 10.167 4.822 2.628 1.182 0.657 0.306 0.153 — 回收率% 101.7 96.4 105.1 94.6 105.1 98.1 98.1 —          注意事项 储存：试剂盒中各种试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶需旋紧以防止蒸发和微生物污染，否则可能会出现错误的结果。 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用板条应拆下后放入备用自封袋，按推荐温度存放。 加样：加样和加同一试剂时，孔与孔之间加样时间间隔过大将导致不同的“预温育”时间，从而明显的影响到测量值的准确性及重复性，每次的加样时间控制在10分钟之内，推荐设置复孔。 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜，洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态。严格遵守给定的温育时间和温度。 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸或干布上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要清除酶标板底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 试剂配制：试剂盒在运输过程中会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用1000转/分离心一分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。所有试剂请按说明书指示请**配制。 显色时间的控制：加入底物后，请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔五分钟），如梯度已经很明显，请提前加终止液终止反应，以避免颜色过深，影响酶标仪读数。 底物：请避光保存底物。在储存和温育时，避免强光直接照射。 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，使用微量振荡器，使用频率，如无微量振荡器，可以在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 不同批号的试剂盒组分不能混用（洗涤液和终止液除外）。   问题分析 若实验结果有问题，请及时对显色结果拍照，并妥善保存未使用板条及试剂，然后联系技术支持。也可参考以下信息以找出原因。 问题描述 可能原因 相应对策   标准曲线梯度差 吸液或加液不准 检查移液器和吸头 标准品稀释不正确 溶解标准品时稍微旋转瓶身，轻轻混匀使粉末完全溶解 洗涤不完全 保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量 显色很弱或无色 温育时间太短 保证充足的温育时间 实验温度不正确 使用推荐的实验温度 试剂体积不够或漏加 检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加 稀释不正确   读数数值低   酶标仪设置不正确 在酶标仪上检查波长和滤光片装置 提前打开酶标仪预热 变异系数大 加液不正确 检查加液情况       背景值高   检测抗体的工作浓度过高 使用推荐的稀释倍数   酶标板洗涤不完全 重新仔细阅读操作步骤，保证每步清洗完全;如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞;是否使用试剂盒配备的洗涤液。 洗液有污染 配制新鲜的洗液   灵敏度低 ELZSA试剂盒保存不当 按说明书要求保存相关试剂 读数前未终止 OD读数前应在每孔中加入终止液

重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS: 9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.产品简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致。重组胰蛋白酶的性质与动物源胰蛋白酶相同。分子量为24kD，**适pH为7.0- 9.0。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 通常所用的胰蛋白酶为从猪yixian提取纯化得到。在生物制药过程中，为了确保生物制品的用药安全，动物来源的原材料正在受到越来越严格的规定，比如在胰岛素和**的生产中。雅心生物生产的重组胰蛋白酶保证了在整个生产过程如发酵、纯化和终产品中无动物源原料使用。生产过程严格遵守NSF ISO9001 2015的规定，按照GMP操作规范生产，确保了产品质量和批次稳定性。 2.产品优势 无动物源性：重组生产，生产过程不使用任何动物源性的原料。 纯度高：生产过程采用自激活方法，无其它任何杂酶污染。 稳定：冻干粉，易于储存和运输；批量生产，产品质量稳定。 3.产品特性 来源 重组大肠杆菌 纯化 HPLC 产品性状 白色冻干粉 比活 ≥3800 USP u/mg pro 纯度 (RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤ 20% α-胰蛋白酶 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.2ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 4.产品用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪yixian来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl或50mM HAc溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，**适PH为7.0-9.0. 6.相关产品： 重组人胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液；序列分析纯重组胰蛋白酶；序列分析纯重组胰蛋白酶；重组羧肽酶B；