V8 蛋白酶;V8 Protease

V8蛋白酶

Cat.No.：66676-43-5

EC：3.4.21.19

全名: 序列分析纯V8蛋白酶；金黄色葡萄球菌V8蛋白酶

别名: V8蛋白酶；谷氨酰胺内切酶；天冬酰胺内切酶

储存条件：冻干粉，2-8℃

来源：基因工程生产，大肠杆菌表达。

1.产品简介

V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH₄HCO₃和pH 4.0的CH₃COONH₄缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键，在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键，且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性，**适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时，可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸（DFP）、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮（TLCK）。

2.产品特性

单位定义：在25℃，pH7.8的条件下，每分钟催化底物（Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide）生成1μmol对硝基苯胺（4-nitroaniline）所需要的酶量为一个酶活性单位。

比活性：25°C时，以Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide为底物测得的活性约为20 U/mg pro.（对应于37°C时，以酪蛋白为底物的活性约为500 U/mg pro）。

3.储存和运输稳定性

储存稳定性：重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃，24个月稳定；

溶解后稳定性：用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下（1mg/ml），6个月稳定；

用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃（1mg/ml，无菌），2个月稳定；

用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃（0.5mg/ml）12h，活性可维持85%以上；

溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。

运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。

4.推荐使用方法

1）使用前注意

   可按使用量分装以限度避免污染或自切。

2）目的蛋白溶解

用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50mM NH₄HCO₃ pH7.8，若溶解度不好对目的蛋白变性，添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。

3）酶切

V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100（W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。

表一：V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂，尿素25℃2h，SDS25℃12h的稳定性

（注：V8蛋白酶0.5mg/ml，50mM Tris-HCl pH8.0）

1. 应用举例：重组V8酶切胰岛素

   100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h，加6 μl磷酸溶液终止反应，C18柱分析：

A：酶切之前                                    B：酶切之后

5.产品优势

1. 序列分析纯蛋白酶：特异性高，稳定性好。
2. 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。
3. 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产 品批次间无差异，质量稳定。
4. 纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
5. 冻干粉：易于储存和运输。
6. 符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
7. 质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

6.相关产品

重组肠激酶；

序列分析纯羧肽酶B；

序列分析纯胰蛋白酶；

序列分析纯糜蛋白酶。