重复给药**试验是药物非临床安全性研究的重要组成部分，是综合性最强、获得信息最多、对临床指导意义的一项毒理学试验，其试验结果可判断受试物的**靶器官，预测受试物可能引起的临床不良反应，确定未观察到**反应剂量水平（NOAEL），从而根据NOAEL推算推测第一次临床试验（FIH)的起始剂量。

       在进行重复给药**试验时，列出以下几点需予以注意。

       1、给药剂量选择

       重复给药**试验原则上至少应设低、中、高3个剂量组，以及1个对照组。高剂量原则上使动物产生明显的**反应，低剂量原则上相当或高于动物药效剂量或临床使用剂量的等效剂量，中剂量在高剂量和低剂量之间设立，以考察**的剂量-反应关系。

       在高剂量组，出现动物死亡或不耐受而降剂量等明显**反应属于正常，但也不能以探究供试品的较宽的安全窗而定的太高。低剂量组剂量可以定的保守一些，以便找到NOAEL值。设定**试验中给药剂量的参考资料包括：1）如果前期做过毒理试验，可同类药物**试验中采用的剂量和结果，比如前期的耐受剂量试验、剂量探索试验等。2)参考药代试验的剂量和结果3）药理或药效试验的剂量和结果。

       2、检测指标

       给药结束，进行组织病理学检查并出具完整的病理学检查报告。对于申报CFDA的，如发现异常变化，应附有相应的组织病理学照片。非啮齿类动物对照组和各给药组主要脏器组织均应进行组织病理学检查；啮齿类动物仅对照组、高剂量组、尸检异常动物应进行详细检查，如高剂量组动物某一组织发生病理改变，需要对其他剂量组动物的相同组织进行组织病理学检查，以便确定NOAEL剂量。

       CFDA《药物重复给药**试验技术指导原则》指出：给药结束后，继续观察恢复期动物，以了解**反应的可逆性和可能出现的迟发**。比如在恢复期，即使在给药期没有发现供试品相关的眼科和ECG变化，也建议进行一次的眼科或ECG检查，以探究可能出现的迟发**。ICH指导原则指出：恢复期目的是检查**影响的可逆性，而不是延迟**，所以如果在给药期如果没有发现**反应，那么在恢复期就没必要再次检测。如果试验进行双报（CFDA+FDA)，要以满足CFDA的基本要求为准。

       同样，对于恢复期的啮齿类动物，如申报CFDA，各剂量组都需要有动物进入恢复期，而对于申报FDA，只需要对照组和高剂量组动物进入恢复期。如果试验进行双报（CFDA+FDA)，要以满足CFDA的基本要求为准。

       如果病理报告需要由美国认证的病理学家书写，病理学家在国外的，如果客户着急申报IND，建议收到病理报告后尽快审计、签署，并通知国外专家将切片、原始报告寄送回国内（从寄送到接受预计3周时间），避免因为没有收到原件而给试验归档造成不便。

       3、正确理解试验数据的意义

       在对重复给药**试验结果进行分析时，应正确理解均值数据和个体数据的意义。啮齿类动物重复给药**试验中组均值的意义通常大于个体动物数据的意义；非啮齿类动物单个动物的试验数据往往具有重要的毒理学意义，是试验动物数量较少、个体差异较大的原因。在分析重复给药**试验结果时应综合考虑数据的统计学意义和生物学意义，要考虑具有统计学意义并不一定代表具有生物学意义；在判断生物学意义时要考虑参数变化的剂量-反应关系、其他关联参数的改变、与历史背景数据的比较等因素。比如Eosnophils（嗜酸性粒细胞）正常值范围较窄，对照组数值为0.01，给药组数值为0.03。虽然可能具有统计学意义，但变化范围在实验室历史背景范围内，且无剂量相关性，其变化就无生物学意义。

       4、正确判断**反应

       给药组和对照组之间检测结果的差异可能来源于受试物有关的**、动物对药物的适应性改变、正常的生理波动或动物应激。在分析试验结果时，尤其要关注参数变化的剂量－反应关系、组内动物的参数变化幅度和性别差异，同时综合考虑多项毒理学指标的检测结果。单个参数的变化往往并不足以判断化合物是否引起**反应。

       比如试验中单纯的肌酸激酶升高可能和应激性反应有关。如果是长期的肌酸激酶升高，可能与心肌病变有关，但结合病理结果可做出更好的判断。大体解剖时观察到肝 脏体积变大、重量增加，临床病理参数发现ALT, AST升高，组织病理学发现肝细胞水样变性，通过多项毒理学指标检测结果可判断肝 脏可能是**靶器官。

       总之，重复给药**试验是药物安全评价的主要内容之一，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。通过重复给药的动物试验表征受试物的**作用，推测临床试验的起始剂量和安全剂量范围，提示临床试验重点监测指标，都具有重要参考意义。

       参考资料：

       1. 药物重复给药**试验技术指导原则

       2. Addendum to S6, preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmacheticals ICH Harmonised Tripartite Guideline.

       作者简介：磐盛，目前在国内一家上市公司从事临床前项目管理工作，工总主要负责药效、药代、毒理、IND申报，通过公司资源打造新药研究及申报整合服务平台，为客户提供一体化新药研究及全球申报解决方案。