N-Glycan聚糖标签,质谱级
订货号 产品名称 包装/pkg
HLS GLAB01W N-聚糖标签-W 4.5mg
HLS DMF001 ⽆⽔DMF 200ul
说明:⽤于N-linked糖蛋⽩(包括抗体)经过PNGase F糖苷酶酶切后溶液中聚糖的超快速标记。 标记后的聚糖具有灵敏的荧光和质谱离⼦
化特性。使⽤LC-FLR or LC-MS的定量分析检测。该试剂独特的化学属性提供了更⾼的荧光定量和最⾼的质谱响应。
物理形态:冻⼲粉;分⼦量:427.1850Da;分⼦式:C21H25N505
标记的糖胺的质量偏移数:+C17H20N402=312.3663Da
Labeled N-Glycan(Da) = Released N-Glycan + Glycan Label Reagent - Reaction by-product(C4H5N103, MW:115.0268)- H
聚糖标签溶解:55ul⽆⽔DMF溶解4.5mg Glycan Label 即浓度=82ug/ul(现⽤现配)
⽆⽔DME(HLSDMF001):只⽤于聚糖标签⼲粉试剂的溶解和标记后样品的稀释
储存条件:冻⼲粉存储在-20°C冰箱,有效期见产品标签;保质期:24⽉在-20°C
适⽤范围:每瓶4.5mg标签试剂溶解后可以标记5个酶切后的聚糖样品
推荐的N-聚糖标记SOP:
-取10ul 1.5 ug/ul mAb脱盐样品加⼊0.6ml低蛋⽩吸附离⼼管
-加10ul 3% BT Surfactant w/5mM TCEP 变性还原缓冲液(50mM HEPES,PH=7.9)混匀;
-⼲浴95°C 加热3min;然后冷却⾄室温
-加10ul 1.5 unit/ul rPNGase F糖苷酶混匀,⼲浴50°C孵育15-30min;然后冷却⾄室温
-加10ul 82 ug/ul Glycan Label标签试剂混匀,室温反应5min
-加15ul ⽆⽔DME;加45uI⼄腈混匀
-标记后的N聚糖样品⽤于LC-FLR or LC-MS检测分
质量控制 |Quality Control
产品组分:经LC⾊谱纯化,QE HF 超⾼分辨质谱分析,试剂中N-聚糖标签:NHS化合物为3:2
标记效率:mAb抗体糖蛋⽩浓度为0.37ug/ul,N-聚糖浓度为20ug/ul标记PNGase F酶切15ug糖蛋⽩释放的N-聚糖,标记效率99.5%
热稳定性:N-聚糖标签试剂在⽆⽔DMF室温下8⼩时稳定;标记的糖胺在室温24⼩时稳定,质谱电离耐热320℃
化学不稳定性:亲和试剂SDS、Tris、DTT、胺、硫醇等浓度⼤于0.1mM不稳定。