缓冲液(Buffer solution)通常是由“弱酸及其共轭碱”或“弱碱及其共轭酸”缓冲对所组成的溶液,能够在加入一定量其他物质时减缓pH的改变。3-(N-吗啉基)丙磺酸,简称MOPS,属于生物缓冲剂,在生物实验中起非常重要的作用,本文将对其进行简介。
MOPS缓冲范围在6.5~7.9之间,适用于叶绿体薄层备样的电子传递和磷酸化研究;可以配制成多种琼脂培养基,在极限培养基中作为无毒缓冲液应用于棒状链霉菌的培养和头孢菌素的生产;可作为二维凝胶电泳中等电聚焦电泳(IEF)的电解质系统成分;还可应用于Northern杂交,作为RNA的分离和转膜时的缓冲液。其缓冲范围与其他常见的缓冲液的对比见下表:
表1. 各种常用缓冲溶液的缓冲范围
缓冲液 |
pKa/25°C |
缓冲范围 |
---|---|---|
MOPS |
7.2 | 6.5-7.9 |
MES |
6.1 | 5.5-6.7 |
Bis-Tris |
6.5 | 5.8-7.2 |
ADA |
6.6 | 6.0-7.2 |
ACES |
6.8 |
6.1-7.5 |
PIPES |
6.8 |
6.1-7.5 |
MOPSO |
6.9 |
6.2-7.6 |
Bis-Tris Propane |
6.8 |
6.3-9.5 |
BES |
7.1 |
6.4-7.8 |
HEPES |
7.5 |
6.8-8.2 |
TES |
7.4 |
6.8-8.2 |
DIPSO |
7.6 |
7.0-8.2 |
TAPSO |
7.6 |
7.0-8.2 |
Tris |
8.1 |
7.0-9.1 |
HEPPSO |
7.8 |
7.1-8.5 |
POPSO |
7.8 |
7.2-8.5 |
EPPS |
8.0 |
7.3-8.7 |
TEA |
7.8 |
7.3-8.3 |
Tricine |
8.1 |
7.4-8.8 |
Bicine |
8.3 |
7.6-9.0 |
TAPS |
8.4 |
7.7-9.1 |
AMPSO |
9.0 |
8.3-9.7 |
CHES |
9.3 |
8.6-10.0 |
CAPSO |
9.6 |
8.9-10.3 |
AMP |
9.7 |
9.0-10.5 |
CAPS |
10.4 |
9.7-11.1 |
常用的10×MOPS Buffer的配制方法如下:
1. 称量41.8g MOPS,置于1L烧杯中;
2. 加约700mL DEPC处理水,搅拌溶解;
3. 使用2N NaOH 调节pH值至7.0;
4. 再向溶液中加入下列试剂:20mL 1M NaOAc(DEPC处理)、20mL 0.5M EDTA(pH8.0)(DEPC处理)
5. 用DEPC 处理水将溶液定容至1L;
6. 用0.45μm 滤膜过滤除去杂质;
7. 室温避光保存。
其中,EDTA作为一种多元弱酸,对于2价、3价的金属阳离子有很好的络合效果,可以有效降低游离金属阳离子的离子浓度,稳定pH;另外EDTA还可以用于中止一些酶促反应。
MOPS是一种两性离子缓冲液,如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用;缓冲液见光后易变黄,淡黄色完全可以使用,颜色过深后不宜使用。在使用过程中需要注意,为了安全和健康,请注意穿实验服并戴一次性手套操作,如不慎与眼睛接触后,立即用大量清水冲洗并马上就医。
相关链接:三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)
3-吗啉丙磺酸(MOPS)
4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)
生化领域常用的几种缓冲溶液及配制方法
本文由苏州亚科科技编辑部编辑
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