HTRF TR-FRET技术

均相时间分辨荧光（Homogeneous TRF, HTRF）技术基于时间分辨荧光 (Time Resolved Fluorescence, TRF) 和荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET) 两大技术原理，将荧光检测的灵敏性、均相免洗和低背景等特点结合在一起。HTRF技术已在基础研究，新靶点发现和验证，高通 量筛选，候选化合物优化等阶段广泛使用，应用于GPCRs，激酶，细胞因 子，磷酸化蛋白，表观遗传，生物大分子（抗体）等检测和定量。 HTRF的能量供体是铕（Eu）和铽（Tb）的穴状化合物。在穴状化合物 内，Eu和Tb被**地嵌合在结构非常稳定的笼状结构内。该结构由 J.M. Lehn's教授发明，并在1987年获得了诺贝尔化学奖。穴状结构可以耐受反应体系中的金属离子、EDTA、DMSO、PH的影响。实验整个操作过程无需 避光，荧光基团不会发生光淬灭，可以连续多次激发读值。 HTRF的能量受体有两种，XL665和d2。它们的光学性质相同，分子量不 同。前者是分子量为105 KD的别藻蓝蛋白（APC），将APC的亚基偶联在一 起后使其不能解离，提高了稳定性。后者分子量为1 KD，在特定实验中有 独特优势。XL665和d2的激发波长均为620 nm，发射波长为665 nm。 HTRF结合Tag-lite技术可以将供体探针（Eu或Tb）和受体探针（ XL665或 d2）标记在活细胞表面的蛋白受体（如GPCR）上，可以用于检测GPCR与 配体的结合情况，或者是进行GPCR同源二聚化实验、GPCR内源化实验。 HTRF试剂盒的产品组合不断增长，助力科学家对热门适应症的研究能力， 包括免疫肿瘤学，神经科学和心脏病学等。除现有试剂盒， HTRF可提供标 记试剂盒和标记定制服务，用于定制开发新的检测靶点和方法。