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引言：

作为亚硝胺杂质的又一受害者，美国默沙东重磅药物西他列汀（sitagliptin，商品名：Januvia）最近无疑被又一次推上了风口浪尖。亚硝胺是化学致癌物，四大食品污染物之一。不但长期小剂量可以使动物或人致癌，而且只要一次较高剂量的“冲击”就可引起癌症发生。食药界对亚硝胺一直是零容忍态度。本期内容将结合核磁共振数据以NTTP为例为大家讲解亚硝胺类杂质的特殊核磁共振数据，以帮助分析人员理解该类结构。

正文：

作为全球第一个上市的DPP-4抑制剂，西他列汀的销售数据无疑十分抢眼，2017年至2020年间年度销售收入均超过30亿美元。随着化合物专利于2024年到期，目前国内申报西格列汀片剂单方和复方企业已经超过30多家。如果因为西他列汀原料中亚硝胺杂质的影响而引发类似“缬沙坦事件”，国内申报企业无疑要遭受“当头一棒”；同样作为广泛使用的用于治疗2型糖尿病的处方药物，西他列汀药物的供应短缺可能会对患者造成伤害。西他列汀未来的走向如何？默沙东会有哪些应对措施？国内企业如何跟进？诸多问题都让我们拭目以待。

作为“臭名昭著”的亚硝胺类杂质的一员，西他列汀相关物质Nitroso-STG-19 (简称NTTP)成为近期影响西他列汀相关药物安全的“幕后黑手”。受到NTTP杂质污染，特定批次的西他列汀相关产品中NTTP含量超过了FDA要求的终生日暴露量要求。尽管尚未有关于NTTP的详细致癌数据，但是基于其类似结构亚硝胺型化合物的已有数据，FDA将NTTP的终生每日暴露量设定在了37 ng，NTTP含量控制成为药物质量控制的重要任务。

对NTTP进行研究那么就必须对该相关物质结构有所了解，NTTP化学名为7-亚硝基-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪，是N-亚硝胺类化合物（N-nitrosamines，缩写NAs）。N-亚硝胺类化合物的特殊化学结构在核磁共振中可能会表现不同性质和结果，该结构的特殊性有时会导致分析人员对该类化合物的鉴定和使用产生疑问。

对于亚硝胺类化合物我们常常更熟悉下图A中亚硝胺结构的画法，其中氮氧双键连接于N-N单键的一侧。但是需要注意的是，实际上该化合物的共振结构B，往往更能体现该化合物的化学特征。在共振结构由于N-N化学键存在明显的双键性质，对于亚硝胺类结构来说，由于氧原子的空间朝向不同，特定的亚硝胺结构表现出两个不同的构型：结构B1和B2，且两个构型结构可以相互转化（小编其实想再给大家讲下N-亚硝胺结构中键长、键角、旋转能垒对化合物结构的影响的，但是超篇幅了，欢迎后台联系主编小姐姐获取详细文献资料）。因此非对称取代的N-亚硝胺类化合物会在特使条件下产生两组信号，分别对应两个不同的构型。例如常见的亚硝胺类化合物NMPA和NEPA的相关性质已经为大家熟知，其在核磁共振图谱中产生的一组信号让人总是无奈，甚至被老师们戏称为“图谱小丑-NXPA兄弟”

对于本次的主角NTTP结构，由于其氨基取代差异明显，不同构型的图谱数据差异更为明显。

由于构型之间转换会受到温度、介质等环境变量影响，该产品的图谱研究中我们分别使用了不同的溶剂进行核磁共振氢谱测试，以使大家更为直观的看到NTTP在不同溶剂中的两个构型的相互转化。

下图所展示数据分别是NTTP产品（QCS CAT NO.: RM-S200807，LOT NO.: 24852）在氘代氯仿和氘代二甲基亚砜中中的核磁共振氢谱结果，可以明显地看到：在使用氘代氯仿为溶剂的条件下NTTP两个构型以1：3的比例共存；而在使用氘代二甲基亚砜条件下其比例为1：4，同时在碳谱的结果中也会看到类似的现象。这便是亚硝胺类结构受到温度、介质等环境变量影响，在不同溶剂条件下分子构型比例变化的结果，而非有些老师误以为的“质量”问题哦。

注：实验数据采集自QCS标准品研制中心批次为24852的样品，样品量20mg，采集仪器：Bruker AVANCE 400。

以QCS标准品研制中心批次为24852的样品检测数据为例，可以看到该产品在高效液相色谱、质谱、TGA数据结果均符合使用要求。

以下为图谱数据：

使用高质量的杂质对照品是获得可信结果的首要条件。QCS提供精心研制的NTTP标准品以应对您对NTTP含量检测需求(如果客户需要小样产品，欢迎后台联系主编小姐姐)。