https://www.cphi.cn 2018-03-05 11:31 来源：生物制品圈 作者：ZXQ
补充信息
图S1糖肽1，糖肽2或糖肽3具有相同的最适低能量HCD CE24。
图S2所有鉴定的具有不同糖基修饰类型糖肽：糖肽1（含有Asn107位点），糖肽2（含有Asn271位点）和糖肽3（含有Asn70位点）的低能量HCD MS2，高能量HCD MS3和CID MS2图谱。
图S3唾液酸酶/半乳糖苷酶消化的A1AT样品，唾液酸酶/半乳糖苷酶/α 1-2,3,4,6岩藻糖苷酶消化的A1AT样品以及唾液酸酶/半乳糖苷酶/α 1-3,4岩藻糖苷酶消化的A1AT样品中的岩藻糖基化糖肽的XIC（提取离子流图）图谱。
表1.双重消化后的A1AT糖肽以及每个位点的核心-和天线-岩藻糖基化的相对峰面积的总结。
表2.卡方检验用于比较从A1AT蛋白质释放的糖链类型（数据来源于以前的结果[19]）和糖肽1（含有Asn107位点）的糖链修饰类型或糖肽2（含有Asn271位点）的糖链修饰类型（表2）之间的主要糖链修饰类型的相对峰强度。
* p值< 0.05 认为差异显著
图1 鉴定A1AT糖基化的实验工作流程。首先将糖基化的A1AT酶切成肽段，然后通过唾液酸酶/半乳糖苷酶双重消化进行糖基的切除。将糖肽进行直接LC-MS/MS分析而不需要释放糖链。
图2在不同的离子传输管温度，喷雾电压和RF％设定条件下，具有A2和FA2糖基修饰类型的A1AT糖肽（Asn271）的源内裂解。
图3具有A2FG糖基修饰类型的A1AT糖肽（Asn271）的图谱：（A）低能量HCD MS2图谱；（B）低能量HCD诱导的高能量HCD MS3图谱；（C）低能量HCD诱导的CID MS2；（D）糖肽裂解的示意图。
图4 各种低能量HCD碰撞能量下具有A2，FA2和A2FG糖基修饰类型糖肽（Asn 271）的MS2裂解模式，表明CE24下的低能量HCD产生信号最强的Y1离子（肽+GlcNAc）。
图5 各种高能量HCD碰撞能量下糖肽（Asn271）Y1离子（肽+GlcNAc）的MS3裂解模式，表明在CE35下的高能量HCD提供了的裂解图谱。
图6 在各种CID碰撞能量下具有A2，FA2和A2FG糖基修饰类型的糖肽（Asn271）的MS2裂解模式，表明在CE30或CE35下这些糖肽获得了相似的裂解图谱。
图7 通过唾液酸酶/半乳糖苷酶消化来区分糖肽（Asn271）的核心-和天线-岩藻糖基化（A：保留时间；A.1：FA2的图谱；A.2：A2FG的图谱）。作为对照，唾液酸酶消化的情况下没有观察到差异（B：保留时间；B.1：A2G2（F）的图谱）。
图8 在3D结构中A1AT的三个糖基化位点Asn70，Asn107和Asn271标记为红色，通过质谱检测到的肽段标记为绿色。
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