2023年05月10日，上海医药行业协会官宣发布了由上海医药行业协会组织起草的《免疫细胞治疗产品生产用质粒生产质量管理指南》（T/SHPPA 019—2023）团体标准，该标准于2023年06月01日起实施，此团体标准从机构与人员、厂房与设备、生产管理、物料管理、细菌种子批、工艺控制、质量控制、包装与贮存、运输等方面进行了明确和要求，生产企业可按照本指南的要求，规范质粒的生产质量管理，进一步确保产品质量，本文梳理了免疫细胞治疗产品生产用质粒GMP管理的主要关注点。

       一、免疫细胞治疗产品

       运载工具——质粒

       1、定义

       质粒（plasmid），系细菌等生物中染色体以外的环状DNA元件，具有自主复制能力，使其在子代细胞中能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。大肠杆菌中的质粒示例图如下：

大肠杆菌中的质粒（4a.njau.edu.cn:8020/bio/2/3-1-1.htm）

       2、运载工具——质粒工作原理

       质粒作为体外基因修饰系统的生产用起始关键物料，被用于将目的基因转染到基因修饰载体中（如慢病毒载体），进一步生产免疫细胞治疗产品，为了把外源基因装到质粒上，科学家们先用限制性内切酶把质粒的环切开，然后把外源基因接到环上。外源基因这种特殊"货物"被装上"车"后，再被送入大肠杆菌体内。如果在外源基因前面加上一段特殊DNA序列作为翻译蛋白质的启动装置，细菌就会把外源基因翻译成人们所需要的蛋白质。看来，借助质粒进行的基因运载过程是成功的，外源基因不仅可以到达目的地，而且还保持正常功能。

把目的基因插入质粒的过程（http://www.med66.com）

       二、《免疫细胞治疗产品生产用质粒生产质量管理指南》标准信息

        三、《免疫细胞治疗产品生产用质粒生产质量管理指南》起草单位、起草人和主要技术内容

       四、生产用质粒GMP管理有哪些值得关注？

       质粒通常不直接作用于免疫细胞治疗产品，其生产、检验和放行管理应参考《药品生产质量管理规范》及其相关附录的要求，应根据其使用于不同的研发阶段、不同的基因修饰载体及免疫细胞治疗产品及其不同的生产工艺需求，企业可以根据风险评估的结果确定生产过程中适用GMP要求的符合程度，全文详见www.ttbz.org.cn。

       1、质粒的生产

       质粒生产应依照已批准的工艺规程和操作规程进行操作并有相关记录，确保生产过程的有效控制，持续、稳定地生产出符合质量要求的产品。应重点关注生产用原材料的质量控制、批间差异、杂质水平、工艺中间控制、污染控制等可能影响免疫细胞治疗产品安全性、有效性的因素；如质粒生产应在受控环境中进行，环境需采取有效控制措施并进行日常监测，以尽可能降低环境微生物及颗粒等对产品可能造成的污染，操作环境的洁净度级别以无菌质粒产品生产操作为例，宜按照下表中的示例进行选择：

       2、质粒的质量控制

       1) 应重点关注安全性和转染有效性相关项目，如超螺旋比例、宿主DNA残留、宿主RNA残留、宿主蛋白残留等。

       2) 对质粒逐批进行检验。一般包括以下项目：理化(外观、pH)、质粒浓度或含量、鉴别(限制性内切酶分析、序列鉴定)、纯度与杂质(Aaso/Azs、超螺旋比例、宿主菌DNA残留、宿主菌RNA残留、宿主蛋白残留、抗生素残留(如适用)等)、无菌及细菌内毒素等。

       3) 应根据质粒在最终的免疫细胞治疗产品生产中的功能及安全性等相关因素，经风险评估建立合理的质粒质量标准；可参照《中国药典》的相关要求，进行检测方法的验证或确认。

       4) 应对质粒的稳定性进行长期监测，选择合理、敏感的考察项目(如外观、pH、浓度/含量、纯度(Aaeo/As)、超螺旋比例等),并根据相关数据制定或调整质粒的贮存条件和有效期。

       3、质粒的质量保证

       1) 应重点关注如质粒生产或质量控制发生变更，应进行充分研究和评估，关注变更对质粒质量的影响，也应将对体外基因修饰系统及免疫细胞治疗产品的影响纳入考虑范围。

       2) 应当制定质粒生产工艺规程并经过批准，工艺规程中应明确质粒产品的关键质量属性(如适用)、生产工艺流程、关键工艺参数和控制范围、中间控制项目及控制标准。应制定生产操作规程，对生产操作步骤等进行详细说明，以确保生产过程的有效运行和有效控制。

       3) 生产工艺过程中任何偏离生产工艺规程的情况均应当有记录，应对偏差进行评估、调查并制定纠正和/或预防措施，有效防止类似偏差的再次发生。

       质粒产品的运输和转运的方式应有明确的操作规程进行规定，运输的方式应进行验证和确认(如适 用),整个运输过程应有完整的记录。

       参考文献

       [1] www.ttbz.org.cn等

       作者简介

       滴水司南，男，生物医药高级工程师，立足于生物医药行业质量管理工作，专注于生物医药产业。