苦参是一种临床常用的中药材，具有燥湿、清热、杀虫、祛风、利尿等功效，苦参的入药部分为根部，主要成分为苦参碱以及氧化苦参碱。氧化苦参碱具有利尿、抗病原体、免疫作用，有研究发现氧化苦参碱对肺癌、胃癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖具有抑制作用，还有抗乙型肝炎病毒作用那么，氧化苦参碱检测方法是什么？

由于目前临床上的苦参产地各异，所以质量也各不相同，为了更好的对苦参质量进行鉴别和管理，本文建立高效液相色谱法对中药苦参药材中的苦参碱和氧化苦参碱的含量进行测定，并且对该实验方法的精密度，重复性，稳定性等方面进行实验考察。

一、仪器与试药：

（1）实验仪器：高效液相色谱仪（LC-2010C），电子分析天平（92SM），超声仪（5150A），色谱工作站。

（2）实验试药：中药样品苦参药材（产地山西），苦参碱和氧化苦参碱的对照药材（中国药品生物制品检定所），水（超纯水）；色谱纯乙腈；其他试剂均为分析纯。

二、方法

（1）对照品溶液制备方法：精密称取苦参碱5.0mg和氧化苦参碱5.0mg，分别放置到5mL的容量瓶中，先加入适量的乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）将其分别溶解，再稀释至刻度线，摇匀即制备成了1.0mg每毫升的两种对照品实验溶液储备液[3]。

（2）供试品溶液制备方法：取中药样品苦参药材适量，使用剪刀尽量剪碎后精密称取51.00mg，再加入70%的乙醇溶液40mL，在90℃的温水浴中进行有效成分提取，每次2h，合并两次提取液，过滤后，精密移取储备液1mL通过2g，直径为1cm的中性氧化铝柱，再依次使用4mL三 氯 甲 烷和4mL三 氯 甲 烷（7）∶甲醇（3）进行洗脱，收集实验洗脱液回收溶剂后，再加入适量的乙醇溶液进行溶解，转移至25mL的容量瓶中加入乙醇稀释至刻度即成供试品溶液储备液，在进样前使用微孔滤膜进行滤过。

（3）色谱条件设定：色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）；流速为（1.0mL/min）；检测波长（210nm）；进样量（每次进样10μL）；柱温为（30℃）。

（4）线性关系考察：分别精密吸取苦参碱和氧化苦参碱两种对照品储备液溶液，使用流动相进行稀释，分别制成0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/mL浓度的两种对照品溶液。分别进样10μL进行检测，记录色谱图，以色谱峰面积做为纵坐标(Y)，以对照品溶液的浓度做为横坐标(X)，分别进行线性回归，得出回归方程。

（5）精密度的实验：分别取6份同一批次的苦参药材样品，按“供试品溶液制备方法”分别进行制备，在“色谱条件设定”下，进样检测，记录测量出的色谱峰面积，平行测定苦参碱以及氧化苦参碱的含量。

（6）稳定性的实验：分别取精密吸取同一批制备苦参药材的供试品溶液10μL，分别在0.5h，1h，2h，4h，8h，12h，24h分别按“色谱设定条件”进样进行测定，记录分别测得的色谱峰面积。

（7）重复性的实验：分别取同一批次制备的供试品溶液，重复按“色谱设定条件”进样6次测定，记录色谱图，考察重复性情况。

（8）加样回收实验：准确称取6份苦参药材样品，分别加入苦参碱和氧化苦参碱的对照品溶液，按“供试品溶液制备方法”分别制备，取各样品溶液10μL进样检测，记录色谱图，计算平均值，计算出回收率。

（9）样品含量测定：取苦参药材6份，按“供试品溶液制备方法”项下进行供试品制备，分别“色谱条件设定”项下进样测定，记录色谱图，计算苦参碱和氧化苦参碱的含量。

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