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中性蛋白酶活力测定方法是怎样的

热门推荐: 中性蛋白酶
来源:CPhI制药在线
  2018-02-23
中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的,属于一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下,本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。那么,中性蛋白酶活力测定方法是怎样的?

  中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的,属于一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下,本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。那么,中性蛋白酶活力测定方法是怎样的

中性蛋白酶活力测定方法是怎样的

  酸性、中性蛋白酶活力单位在一定温度(40oc土o.2OC)和相应的pH条件下(酸性蛋白酶pH3.0,中性蛋白酶pH7.2),在1min内水解酷蛋白产生相当于1问酣基氨基酸(由酷氨酸等同物表示)的酶量,为1个酶活单位,以U表示。

  蛋白酶在一定的温度和pH条件下,水解酷蛋白底物产生含有酣基的氨基酸(如z酷氨酸、色氨酸),在碱性条件下,可将福林试tj(Fo!in)还原,生成铝蓝与鹊蓝,其颜色的深浅与酣基氨基酸含量成正比。通过在680nm测定其吸光度,得到酶解产生的酣基氨基酸的量,进而计算蛋白酶活力。

  试剂和材料:碳酸铀溶液、三氯Z酸溶液、盐酸溶液、盐酸溶擅液、氢氧化纳溶液。

  福林(Folin)试剂于2000mL磨口回流装置中加入鸽酸铀(Na2W040)100.0g、铝酸铀(Na2Mo0425.0g、水700mL、85%磷酸50mL、被盐酸100h,取下回流冷却器,在通风橱中加入硫酸铿(Li2S04)50g,水50mL和数滴浓澳水(99%),再微沸15min,以除去多余的澳(冷却后仍有绿色需再加澳水,再煮沸除去过量的澳),冷却后加水定容至1000mLot昆匀、过滤。试剂应呈金黄色,贮存于棕色瓶内。使用时,以1份福林(Folin)试剂与2份水混匀,制成稀福林(Folin)试剂。

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