中性蛋白酶活力测定方法是怎样的

https://www.cphi.cn 2018-02-23 15:26 来源：CPhI制药在线

中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。那么，中性蛋白酶活力测定方法是怎样的？

　　中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。那么，中性蛋白酶活力测定方法是怎样的？

中性蛋白酶活力测定方法是怎样的

　　酸性、中性蛋白酶活力单位在一定温度(40oc土o.2OC)和相应的pH条件下(酸性蛋白酶pH3.0，中性蛋白酶pH7.2)，在1min内水解酷蛋白产生相当于1问酣基氨基酸(由酷氨酸等同物表示)的酶量，为1个酶活单位，以U表示。

　　蛋白酶在一定的温度和pH条件下，水解酷蛋白底物产生含有酣基的氨基酸(如z酷氨酸、色氨酸)，在碱性条件下，可将福林试tj(Fo!in)还原，生成铝蓝与鹊蓝，其颜色的深浅与酣基氨基酸含量成正比。通过在680nm测定其吸光度，得到酶解产生的酣基氨基酸的量，进而计算蛋白酶活力。

　　试剂和材料：碳酸铀溶液、三氯Z酸溶液、盐酸溶液、盐酸溶擅液、氢氧化纳溶液。

　　福林(Folin)试剂于2000mL磨口回流装置中加入鸽酸铀(Na2W040)100.0g、铝酸铀(Na2Mo0425.0g、水700mL、85%磷酸50mL、被盐酸100h，取下回流冷却器，在通风橱中加入硫酸铿(Li2S04)50g，水50mL和数滴浓澳水(99%)，再微沸15min，以除去多余的澳(冷却后仍有绿色需再加澳水，再煮沸除去过量的澳)，冷却后加水定容至1000mLot昆匀、过滤。试剂应呈金黄色，贮存于棕色瓶内。使用时，以1份福林(Folin)试剂与2份水混匀，制成稀福林(Folin)试剂。

中性蛋白酶

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