脂肪酶活力测定是常见的一种测试步骤,测试时用到的试剂与器材有:
1、聚乙烯醇(P. V. P.)橄榄油乳化液:称取40克聚乙烯醇,加蒸馏水约1000毫升,在小火上加热,并不停搅拌,至聚乙烯醇全部溶解,冷却后定容至1000毫升。用双层纱布过滤,滤液备用。取4%聚乙烯醇溶液150毫升,加50毫升橄榄油,用高速组织捣碎机搅动6分钟,即成乳白色聚乙烯醇橄榄油乳化液,保存于低温下(4℃)备用。
2、0.025M磷酸缓冲液(pH7.5)。0.025M磷酸氢二钠溶液的配置:取Na2HPO4·2H2O 4.45g溶于1L蒸馏水中,0.025M磷酸二氢钠溶液的配置:取NaH2PO4·H2O 3.45g(或NaH2PO4·2H2O 3.90g)溶于1L蒸馏水中。将0.025M磷酸氢二钠84ml与0.025M磷酸二氢钠16ml混合,即为0.025M磷酸缓冲液。
3、0.05N氢氧化钠标准溶液
4、1%酚酞指示剂:取1g酚酞溶于100ml 70%乙醇溶剂中。
5、95%乙醇 材料: 鱼、虾、贝的肝胰脏、胃、肠标本。 器材: 匀浆器、离心机、恒温水浴。高速组织捣碎机、酸式滴定管、滴定管架、镊子、剪子、锥形瓶、移液管、烧杯。
在做实验时需要重视的注意事项有:
1、使用聚乙烯醇的聚合度为1000-1750,如聚合度低,乳化效果差。橄榄油乳化液在冰箱中保存三天左右仍能保持稳定。
2、反应终了加乙醇可停止酶作用和溶解脂肪酸,以利滴定,乙醇用量以不低于总容量60%为宜。
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