无菌工艺简单概括来说就是要做好消除和阻隔外源性的污染，外源性的污染消除以后不会再出现，只会由其它的污染源带入，比如说无菌产品你把它灭菌后，处于密封状态时它自己是不会再长菌的，如果说灭菌后又发现了微生物，一定是由于外源性因素重新污染了，所以说产品它又染菌了。这就是我们的无菌生产工艺一定人做好的两件事情，一个就是要消除产品本身的微生物负荷，把它由一个有菌的状态，通过一些无菌工艺，将产品转变成无菌的状态，另一个工作就是要保持产品的无菌状态，无菌生产工艺最终就是要解决好这两方面的问题，控制灭菌产微生物负荷和选择合适的除菌方法。当然对于无菌生产过程的控制是非常重要的，无菌工艺的核心就是生产工艺，生产中微生物可能会从任何过程引入，人、机、料、法、环、测都会引入。但生产的产品我们不可能都进行检验，当检验的产品微生物测试的结果是合格的，我们只能说样品的无菌水平是合格，并不能绝 对的说，整批产品都是无菌的，除非把所有的产品都检测了，当然所有产品都检测了，也就失去了生产的意义，此时无菌工艺模拟就是一种证明我们无菌生产过程对于微生物控制是否有效的一种手段。

       无菌工艺模拟灌装验证是采用微生物培养基替代产品对无菌工艺进行评估的验证技术。无菌工艺模拟灌装验证通常需要将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。然后将装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长，并对结果进行评价，借以确定实际生产中产品被污染的概率。

       关键要素一：无菌工艺模拟灌装验证次数和频率，新生产线在投产之前要做初始验证，每班次应连续进行3次合格试验，试验通过后该生产线才能投入使用。对于一台灌装机对应多台同型号冻干机的情况，应选取最差条件进行验证，选择策略为选取生产线最远端冻干机连续验证三批，剩余冻干机至少各验证一批；再次验证时每台冻干机各验证一批。初始验证后，每条生产线每班次半年进行1次，每次至少1批。

       对经评估可能影响产品无菌性的变更，如空气净化系统和设备的改进、生产工艺重大变动、生产线配置及人员重大变动等，应当通过至少一批再验证对工艺无菌保证能力进行评估。

       关键要素二：无菌工艺模拟条件及要求，选择模拟生产的最差工艺条件，例如在准备阶段将物料、灌装部件、待灌装的小瓶、胶塞、储液罐、冻干机和无菌过滤器按照工艺要求在无菌条件下保存到被允许的最长时间。灌装时在关键区域保留最多的人员等等。模拟灌装期间应模拟所有类型和规定数量的干预，应包含但不限于上次模拟灌装到本次模拟灌装期间出现的所有异常情况。

       关键要素三：灌装参数和数量灌装速度，灌装时应选用所有品种中最大的瓶口容器，采用工艺允许的最慢灌装速度。采用最小的瓶口容器，采用工艺允许的最快灌装速度。灌装体积：粉针灌装工艺，粉末体积考虑分装设备调节粉末重量范围，及溶于培养基溶液。溶液量需足以涂在容器的内表面并有足够的氧气支持微生物生长，灌装量应能达到容器体积的1/3~1/2。

       液体灌装工艺：溶液量需足以涂在容器的内表面并有足够的氧气支持微生物生长，灌装量应能达到容器体积的1/3~1/2。使用氮气保护产品的生产线：无菌工艺模拟应进行充氮保护模拟操作。

       运行持续时间：通常不少于一个完整批的实际生产操作时间。无菌工艺模拟灌装验证需要模拟整个工艺过程，包括从部件、材料的灭菌准备，一直到完成灌装和容器密封的整个过程。

       灌装批次量：不得低于10000瓶，对于批量≤10000瓶的产品生产线，可采用不低于批量的模拟灌装量。

       关键要素四：培养基准备，培养基选择：根据实际的生产工艺和生产环境选择适用于大多数微生物生长的胰蛋白胨大豆肉汤（非无菌培养基）3%溶液作为模拟介质。粉针制剂产品选用PEG8000和胰蛋白胨大豆肉汤（无菌培养基）3%溶液作为模拟介质。但当产品无菌检测中发现厌氧菌时，应考虑选择硫乙醇酸盐培养基来代替胰蛋白胨大豆肉汤培养基。

       无菌工艺模拟操作，按照标准操作规程进行物料传递、部件灭菌、人员进出、设备操作和清洁。对注射用水过滤器、压缩空气过滤器、料液过滤器在无菌工艺模拟灌装验证试验前进行完整性测试。

       干扰无菌工艺模拟灌装验证试验应当尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对无菌结果有风险的关键操作，及生产中可能出现的各种干扰。

       关键要素五：样品收集与培养，灌装样品的标识，按分装时间顺序把灌装后的密封好的样品按照时间段顺序标记，分装时间，日期，以助于无菌工艺模拟发现阳性时的追踪调查，识别可能的根本原因。如因操作不当或储存不当而导致培养基密封性缺陷的，且有批准的操作规程规定可以进行剔除报废的产品才可以丢弃，丢弃的样品应记录数量和原因后剔除。

       灌装样品培养，扎盖后摇晃小瓶并确保所有的模拟物料溶解，且内表面被培养基接触。要做到全部灌装样品培养、检查， 5℃培养7天，然后倒置，在30～35℃培养7天，7天和14天时检查全部样品的微生物生长情况。若发现污染应注明批号和标记，同时检查密封情况。若有破损注明原因。污染的样品应做微生物鉴别，鉴别到种。灌装样品培养结束后，随机取出140支，进行灵敏度试验。

       环境监测：环境条件应满足生产操作的实际条件，并按照日常环境监测要求进行环境监测。

       关键要素六：可接受标准及偏差纠正措施，若模拟灌装失败，则进行生产过程调查，进行风险评估并采取措施，但不仅限于：

       生产环境沉降菌、悬浮粒子、浮游菌监测情况；

       人员、设备污染监测情况；

       操作间、层流压差情况；

       所用物料微生物、清洗、灭菌情况；

       操作人员的操作方法、培训情况；

       模拟灌装过程中的异常情况及处理情况；

       设备、零部件清洗、灭菌情况；

       生产过程中的贮存情况、时限是否符合要求；

       生产前后过滤器的完整性测试情况。

       作者简介：@A001，一名走在制药路上的小奋青，从事制剂生产质量管理，扎根现场十二年，质量体系的践行者与监督者。