https://www.cphi.cn 2023-04-18 16:26 来源：CPHI制药在线 作者：滴水司南
2023年4月6日，国家药典委员会官网发布"关于通则0541电泳法第五法SDS-聚丙烯酷胺凝胶电泳法草案的公示"，拟对2020年版《中国药典》第三部第463页暨第四部第69页收入的方法--0541电泳法第五法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法部分内容进行修订，公示期自发布之日起3个月。说起电泳法，常见用于分析蛋白质和核酸等混合物分离的技术，它主要的目的是用于分析而非制备，主要应用领域是生物和生化研究、蛋白质化学、临床研究等领域。
一、了解电泳法常用专业术语
1. 电泳：
是指溶解或悬浮于电解液中的带电荷的蛋白质、胶体、大分子或其他粒子，在电流作用下向其自身所带电荷相反的电极方向迁移。
2. 电泳法：
是指利用溶液中带有不同量电荷的阳离子或阴离子，在外加电场中使供试品组分以不同的迁移速度向对应的电极移动，实现分离并通过适宜的检测方法记录或计算，达到测定目的的分析方法。
3. 移动界面电泳：
也称自由溶液电泳是指不含支持物的电泳，溶质在自由溶液中泳动，适用于高分子的检测。
4. 区带电泳：
是指含有支持介质的电泳，带电荷的供试品（如蛋白质、核苷酸等大分子或其他粒子）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，在电场的作用下，向其极性相反的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带。
5. 相对迁移率：
供试品和对照品/标准品的电泳区带有时可用相对迁移率（R'm）进行比较。其计算式如下：
6. 两性电解质：
是指既能当酸又能当碱用的电解质。两性电解质通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。
二、常见的电泳分析方法，你知道几种？
2020年版《中国药典》0541电泳法收载了六种常用的电泳法分类，分别是：
1) 第一法，纸电泳法；
2) 第二法，醋酸纤维素薄膜电泳法；
3) 第三法，琼脂糖凝胶电泳法；
4) 第四法，聚丙烯酰胺凝胶电泳法；
5) 第五法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE法)；
6) 第六法，等电聚焦电泳法。
那么以上六种电泳分析方法的主要区别，梳理如下表所示：
三、新旧第五法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE法)对照看
第五法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE法)包括四部分内容，分别为1.仪器装置、2.试剂、3.测定法、4.结果判定，其中【2.试剂鉴别】、【4.结果判定】项下有发生变化，涉及标准项目变更对照如下表所示：
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项目/编号 |
《中国药典》2020年版 |
《中国药典》2025年拟修订版 |
变更解读 |
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2试剂 （9）非还原型供试品缓冲液（4×) |
称取三羟甲基氨基甲烷3.03g，溴酚蓝20mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至约80ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml。 |
称取三羟甲基氨基甲烷3.03g，溴酚蓝80mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至约80ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml。 |
溴酚蓝，是一种有机化合物，分子式为C19H10Br4O5S，分子量为669.961，浅黄色到棕黄色粉末；易溶于氢氧化钠溶液，溶于甲醇、乙醇和苯，微溶于水，最大吸收波长422nm。 常用做电泳指示染料，凝胶中电泳迁移速度在小分子核酸或蛋白质区域。 |
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2试剂 （10）还原型供试品缓冲液（4×) |
称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝20mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至约80ml，加入β-巯基乙醇20ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml（或称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝20mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至80ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml。在使用前，加入二硫苏糖醇至100mmol/L）。 |
称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝80mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至约80ml，加入β-巯基乙醇20ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml（或称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝80mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至80ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100ml。在使用前，加入二硫苏糖醇至100mmol/L）。 |
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4结果判定
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凝胶显色处理完毕后，对其进行拍 照或扫描，通常用商品化的带有数据分析软件的凝胶扫描系统进行拍照和分析，得到相对迁移率值或以其他形式如分子量等体现的相对迁移率。每条谱带距分离胶顶部的距离为迁移距离，将每条蛋白质谱带的迁移距离除以染料前沿的迁移距离，即为蛋白的相对迁移率， 计算公式如下：相对迁移率（Rm）＝蛋 白迁移距离/溴酚蓝指示剂迁移距离 然后根据需要进行以下结果分析。 |
凝胶显色处理完毕后，对其进行拍照或扫描，通常用商品化的带有数据分析软件的凝胶扫描系统进行拍照和分析，得到相对迁移率值或以其他形式如分子量等体现的相对迁移率。每条谱带距分离胶顶部的距离为迁移距离，将每条蛋白质谱带的迁移距离除以染料前沿的迁移距离，即为蛋白的相对迁移率，计算公式如下：相对迁移率（Rm）＝蛋白迁移距离/溴酚蓝指示剂迁移距离 然后根据需要进行以下结果分析。如有必要，可采用适宜方法，将凝胶进行干胶处理、保存。 |
为了便于电泳检验结果的可追溯性，一般电泳后，可采用适宜方法，将凝胶进行干胶处理、保存 |
参考文献
[1] www.chp.org.cn
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