2023年4月24日，国家药典委员会官网发布“关于通则0502 薄层色谱法修订草案的公示”，拟对2020年版《中国药典》第四部第59页收入的方法——0502 薄层色谱法部分内容进行修订，公示期自发布之日起3个月。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，是药品的鉴别、杂质检查或含量测定的常用方法之一。

       一、了解薄层色谱法常用专业术语

       1.薄层色谱法（Thin-layer chromatography, 简称TLC)：

       系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。

       2.薄层色谱扫描法：

       系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于鉴别、检查或含量测定。可根据不同薄层色谱扫描仪的结构特点，按照规定方式扫描测定，一般选择反射方式，采用吸收法或荧光法。除另有规定外，含量测定应使用市售薄层板。

       3.比移值（Rf）：

       系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。

       二、常见的薄层色谱法仪器，你认识几种？

       在药品检测领域，有“四大名谱”，它们分别为色谱、光谱、质谱、波谱，可以说只要有分析任务的地方都在使用色谱分析法，薄层色谱法（ TLC）因其操作简单、成本低廉、灵敏度高、分离速度快、可同时分析多个样品而成为目前应用最广泛的分离技术之一，常见的薄层色谱法仪器分别是：

       1)薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。

       2)点样器： 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

       3)展开容器：上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开槽。

       4)显色装置：喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

       5)检视装置：为装有可见光、254nm 及 365nm 紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。暗箱内光源应有足够的光照度。

       6)薄层色谱扫描仪：系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。

       三、新旧0502 薄层色谱法主要内容抢先看

       根据2020年版《中国药典》实施以来的反馈意见，结合各国药典色谱法通则的修订变化，此次有以下几项内容有发生变化，红色字体为删除内容，蓝色字体为增订内容变更主要内容对照如下：

       （一）系统适用性试验——分离度

       定量薄层色谱法的分离度是基于两相邻峰（斑点）距离和两相邻峰的峰宽计算，此次修订稿中增加了以半高峰宽计算分离度的公式。但考虑各版《中国药典》的延续性，仍保留原有公式作为过渡，并明确当有异议时，分离度（Rs）应以半高峰宽（Wh/2）的计算结果为准，主要修订内容如下：

       (3) 分离度（或称分离效能） 鉴别时，供试品与标准物质色谱中的斑点 均应清晰分离。 当在薄层色谱扫描法用于限量检查和含量测定时， 要求定量待测 峰与相邻峰之间有较 良好的分离度， 两峰分离度 (Rs ) 的可用下列计算公式为计算：

       式中， 分别为两峰的比移值， ；

       分别为相邻两峰与原点的距离， ；

       分别为相邻两峰的半高峰宽；

       分别为相邻两峰的峰宽；

       a 为展开剂迁移(展开)距离。

       除另有规定外，分离度应大于1.0。

       当有异议时，分离度()应以半高峰宽()的计算结果为准。

       式中 d2 为相邻两峰中后一峰与原点的距离；

                    d1 为相邻两峰中前一峰与原点的距离；

                    W1 及 W2 为相邻两峰各自的峰宽。

       除另有规定外，分离度应大于 1.0 。

       在用于化学药品杂质检查的方法选择时，可将杂质对照品用供试品自身稀释的对照溶液溶解制成混合对照溶液， 也可将杂质对照品用待测组分的对照品溶液 溶解制成混合对照标准溶液， 还可将采用供试品以适当的方法降解方法获得的溶 液作为对照溶液，上述溶液点样展开后的色谱图中，应显示清晰分离的斑点。

       （二）薄层色谱条件（参数）

       根据各国药典，修订稿增加了薄层色谱条件（参数）允许调整的内容，并以简单示例说明如何调整，主要修订内容如下。

       4. 色谱条件调整

       品种正文项下规定的色谱条件可作如下调整：

       展开剂的组成比例： 占比小的组分，可在相对值±30%或绝 对值±2%范围， 取较大者进行调整；其他组分的调整不得过绝 对值 10%。占比小的组分是指小于 或等于(100/n) %组分， n 是展开剂中各组分个数。当展开剂由 3 个组分组成， 如某组分占比为 10% ，为占比小的组分，其相对值±30%的范围是 7%~13% ，绝 对值±2%的范围是 8%~12% ，可在较大的相对值范围调整。

       除另有规定外，展开剂中水相组分的 pH 值可在±0.2 pH 单位范围内调整。 展开剂缓冲组分中盐的浓度可在原规定值±10%范围内调整。

       点样体积： 如使用 2~10μm 的细颗粒薄层板，可在规定点样体积的 10%~20%范围调整。

       应评价色谱条件调整对分离和检测的影响，必要时对调整后的方法进行确 认。若调整超出上述或品种项下规定的范围， 将被认为是对方法的修改， 需要进 行充分的方法学验证。

       当对调整色谱条件后的测定结果产生异议时， 应以品种项下规定的色谱条件 的测定结果为准。

       参考文献

       [1]www.chp.org.cn