为了规范基因治疗产品的非临床研究，统一评价标准，引导基因治疗产品的研究与申报，提高企业研发效率，并与ICH相关指导原则工作同步，CDE通过前期调研、ICH S12《基因治疗产品非临床生物分布考虑》国内专家工作组起草、专家咨询以及部门技术委员会讨论，2021年12月3日，国家药品监督管理局药品审评中心官网正式发布《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）》（成文时间2021年11月30日），自发布之日起实施。本文主要基于CDE《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》、《当前对CAR-T类产品非临床研究与评价的一些考虑》和《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》，为大家梳理了本指导原则中关于基因治疗产品非临床研究与评价考虑关键内容并结合自己的解读与大家分享。

       一、基因治疗产品非临床研究与评价研究挑战

       随着基因治疗技术发展日新月异，基因治疗取得了突破性进展，为难治性疾病提供了全新的治疗理念和思路。有必要制定合适的指导原则规范和引导这一新兴药物产业的健康发展。基因治疗产品涉及的技术比较新颖，没有积累传统药物一样成熟的非临床研究与评价的技术标准，存在较大的不确定性，ICH组织也开始协调基因治疗领域的国际注册技术要求。CDE基于行业发展和监管的需要，制定本指导原则，以明确基因治疗产品非临床研究内容，统一评价标准，提高研发效率，同时积累基因治疗产品研发和监管经验，更好更有效地参与ICH基因治疗指导原则制定工作，建立协调一致的国际行业标准。

       二、基因治疗产品非临床研究主要内容

       基于目前的认知，与常规的非临床研究一样，基因治疗产品的非临床研究建议遵循3R原则（替代/减少/优化），以避免不必要的动物及其它资源的使用。基因治疗产品与传统药物相比，非临床研究与评价存在诸多差异，目前非临床评价较大程度依赖于动物疾病模型，但是人员细胞对于动物而言就属于异源性，从动物的反应来推断人体的反应，不够准确，由于基因治疗产品种类、作用机制、作用特点、给药途径、安全性风险等方面的差异，应基于风险分析设计并开展非临床研究，综合评估临床试验受试者潜在风险-获益，随着技术的不断完善，CDE制定《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则（试行）》，为基因治疗产品非临床研究设计提供建议，并作为非临床评价的参考以支持开展相应的临床试验。基因治疗产品非临床研究为临床试验提供支持性信息，研究内容一般为药理学、药代动力学、毒理学。

       1、适用范围

       2、基因治疗产品非临床研究——药理学主要内容

       基因治疗产品药理学研究是为了在体内、体外研究产品与治疗靶点相关的作用机制和效应，明确基因治疗产品的生物学作用特点，应选择合适的体内或体外模型进行，并以此评价基因治疗产品在人体中潜在治疗作用和效果，有助于后续非临床和临床试验的剂量选择。

       2.1 如何选择药效学评价研究的动物模型？

       动物疾病/损伤模型可能相对正常健康动物模型更加适于评价“风险-获益”关系，更有机会发现可以用于临床试验监测的活性/**生物标志物。选择动物模型时应考虑以下因素：

       (1)受试物在动物模型中复制能力和转导（转染、感染）特性；

       (2)动物模型中与受试物相关的细胞/受体表达和组织分布；

       (3)受试物中生物调节活性的组分对动物模型转基因的表达水平和组织表达特异性的影响；

       (4)受试物导入基因产物引起的生物学效应；

       (5)动物预存免疫学状态对受试物的影响；

       (6)动物模型内在的与导入基因同源的基因及其产物对药效的影响；

       (7)转基因动物用于特定受试物药效评价的适用性；

       (8)动物模型实际可行的安全剂量和体积；

       (9)受试物在动物模型中的生物分布特征等。

       注意事项：在选择动物疾病/损伤模型时需要考虑其局限性，包括模型内在的固有变异、历史/基线数据不足、生理功能和解剖结构的技术性限制、模拟人体疾病/损伤病理过程的可靠性等。如果单个动物试验模型不足以论证相关问题，则应采用多种动物模型开展相应研究，进行综合分析评价。

       2.2 药效学研究如何进行试验设计？

       (1)概念验证研究（POC）：

       为临床试验提供可行性和有效性的非临床证据，并提供可能的生物学作用机制、潜在的安全性问题等信息，包括体外研究和体内研究。

       (2)安全药理学研究：

       是研究受试物在治疗剂量范围内或治疗范围以上剂量时，对生理功能潜在的非期望作用，一般包括对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统的影响，通常应在临床试验前完成。采用基于风险的评价策略开展基因治疗产品的安全药理学试验，考虑因素一般包括：导入基因作用机制、载体类型、生物分布、给药途径和临床给药方案等。安全药理学试验通常采用单次给药方式，其研究终点也可以纳入到一般毒理学试验中。

       3、基因治疗产品非临床研究——药代动力学主要内容

       3.1 药代动力学研究如何进行试验设计？

       (1)暴露量：根据产品具体特点考虑非临床研究中的实际暴露情况。

       (2)生物分布：生物分布是受试物在相关动物种属中给药部位、靶组织和非靶组织包括体液（例如血液、脑脊液、玻璃体液）在内的体内分布、存续和清除。如采用足够的剂量，以临床拟用的给药途径，在相关动物种属或动物模型中开展，不仅包括导入基因的检测，还可能包括导入基因表达产物、载体的检测等。

       (3)脱落：指基因治疗产品通过排泄物（尿液、粪便）、分泌物（唾液、鼻咽液等）或皮肤（脓疱、疮、伤口）排出体外。如根据复制型基因治疗产品的特点评估开展脱落分析的必要性。

       4、基因治疗产品非临床研究——毒理学研究主要内容

       4.1 一般毒理学试验设计的考虑要点？

       (1)动物种属选择：所选动物种属应与基因治疗产品具有良好的生物学相关性，采用相关动物种属开展试验。

       (2)剂量设计：给药剂量应该包括在最合适的非临床药效模型中确定的药效剂量范围或拟推荐的临床剂量范围。最高剂量一般期望获得明显**反应的相关信息，通常为药效学最高剂量的一定倍数或拟推荐临床最高剂量的一定倍数。

       (3)分组：设低、中、高3个剂量组，以及合适的对照组，例如溶媒、辅料、空载体、含有非功能转基因的载体等对照组。

       (4)给药方案：应最 大程度地模拟临床拟用给药方案，给药途径、给药频率和给药期限应能适当反映临床使用情况。对于临床研究拟单次给药的基因治疗产品，可开展扩展的单次给药或重复给药**试验；对于临床研究拟多次给药的基因治疗产品，应进行重复给药**试验，给药次数和给药频率一般不应低于临床给药次数和频率。

       (5)试验期限：通常会长于其它生物制品的标准**试验持续时间，应包括多个解剖时间点（至少应包括导入基因峰值时间点、稳态时间点等），以便评价基因治疗产品发挥作用的持续性，以及剂量/暴露量与**反应、生物分布与**反应的关系。

       (6)检测指标：除常规观察指标外，一般毒理学试验需结合基因治疗产品特性，考虑增加合适的观察指标，如生物活性细胞因子分泌、异常/异位增生性病变、免疫原性/免疫**等。

       4.2 免疫原性和免疫**研究如何进行？

       免疫原性可能来源于产品中的非人源化组分、导入基因的表达产物、载体、基因编辑产生的非预期的肽/蛋白质等。病毒载体类基因治疗产品相对更容易产生免疫原性。此外，还应考虑实验动物预存免疫对试验的影响；已知对免疫系统有影响的基因治疗产品，如编码生长因子、细胞因子等的产品，通常需要开展免疫**研究，应包括体液和/或细胞免疫终点评价。

       4.3 生殖**研究如何进行？

       通常需要开展胚胎-胎仔发育**和围产期**研究，除非有基于具体产品类型的特殊考虑并具有科学合理性。如果基因治疗产品拟用于有生育可能或妊娠人群，应研究产品对胎儿的影响（例如细胞因子局部生成后通过胎盘转运），开展胚胎-胎仔发育和围产期**试验。如果在一般毒理学试验中发现有潜在的生殖器官**反应，应开展生育力和早期胚胎发育**试验。

       4.4 遗传**研究考虑要点？

       目前对于判断细胞基因组插入/修饰是否会产生遗传**、是否最终会发生癌变依然还缺乏系统的认知，需要分析基因组改变（载体或遗传物质整合进基因组、对基因组编辑等）的特征，并评估相关潜在风险。

       通常不需要进行标准的遗传**组合试验，但应根据基因治疗产品的特点、产品的具体适应症、载体的已有信息、导入基因序列结构等，评估基因治疗产品整合进基因组的可能性，判断是否需要开展另外的遗传**研究。

       基因修饰噬菌体、细菌和真菌相关的产品可以不进行遗传**研究，一般认为这些产品通常不会直接与宿主细胞基因组发生相互作用。

       4.5 致癌性研究考虑要点？

       标准的啮齿类动物致癌性试验一般不适用于评价基因治疗产品。可采用证据权重（7WoE）方法来评估致癌性风险，必要时进行致癌性研究。

       4.6 复制型病毒风险考虑要点？

       采用复制缺陷病毒载体的基因治疗产品，需要评估在生产的过程中是否有可能产生复制型病毒，应考虑到该病毒在不同物种之间的流行性以及传播性。

       4.7局部耐受性考虑要点？

       根据产品类型、给药途径和临床试验方案，某些基因治疗产品（例如眼内给药、肌肉注射、瘤内给药等）应开展局部耐受性试验，适当时可以结合在一般毒理学试验中进行。

       参考文献

       [1]www.cde.org.cn.